1 引言

氣相色譜法是利用氣體作流動(dòng)相的色層分離分析方法。汽化的試樣被載氣（流動(dòng)相）帶入色譜柱中，柱中的固定相與試樣中各組份分子作用力不同，因此從色譜柱中流出時(shí)間不同，組份因而彼此分離。根據(jù)該原理，采用適當(dāng)?shù)蔫b別和記錄系統(tǒng)，就可以繪制出各組份流出色譜柱的時(shí)間和濃度對(duì)應(yīng)的色譜圖。再根據(jù)圖中表明的出峰時(shí)間和順序，可對(duì)化合物進(jìn)行定性分析；根據(jù)峰的高低和面積大小，可對(duì)化合物進(jìn)行定量分析。氣相色譜分析具有效能高、靈敏度高、選擇性強(qiáng)、分析速度快、應(yīng)用廣泛、操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)，適用于易揮發(fā)有機(jī)化合物的定性、定量分析。對(duì)非揮發(fā)性的液體和固體物質(zhì)，可通過(guò)高溫裂解，氣化后進(jìn)行分析，且其可與紅光及收光譜法或質(zhì)譜法配合使用。以色譜法做為分離復(fù)雜樣品的手段，可以達(dá)到較高的準(zhǔn)確度，故而也是司法鑒定中檢測(cè)有機(jī)化合物的重要分析手段之一。

此前，我們已經(jīng)對(duì)氣相色譜儀進(jìn)行了一個(gè)較為全面的說(shuō)明，接下來(lái)，筆者將對(duì)重點(diǎn)對(duì)色譜分析方法及其應(yīng)用進(jìn)行闡述。

2 基本原理

氣相色譜主要是利用物質(zhì)的沸點(diǎn)、極性及吸附性質(zhì)的差異來(lái)實(shí)現(xiàn)混合物的分離，其氣相分析流程如圖1所示。

待分析樣品在汽化室汽化后被惰性氣體（即載氣，也叫流動(dòng)相）帶入色譜柱，柱內(nèi)含有液體或固體固定相，由于樣品中各組分的沸點(diǎn)、極性或吸附性能不同，每種組分都傾向于在流動(dòng)相和固定相之間形成分配或吸附平衡。但由于載氣是流動(dòng)的，這種平衡實(shí)際上很難建立起來(lái)。正是由于載氣的流動(dòng)，使樣品組分在運(yùn)動(dòng)中進(jìn)行反復(fù)多次的分配或吸附/解吸附，結(jié)果是在載氣中濃度大的組分先流出色譜柱，而在固定相中分配濃度大的組分后流出。當(dāng)組分流出色譜柱后，立即進(jìn)入檢測(cè)器。檢測(cè)器能夠?qū)悠方M分轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)，而電信號(hào)的大小與被測(cè)組分的量或濃度成正比。當(dāng)將這些信號(hào)放大并記錄下來(lái)時(shí)，就是氣相色譜圖了。它包含了色譜的全部原始信息。在沒(méi)有組分流出時(shí)，色譜圖記錄的是檢測(cè)器的本底信號(hào)，即色譜圖的基線。

3 色譜分析

從常見(jiàn)色譜圖中，我們可以看到，色譜峰是組分在色譜柱運(yùn)行的結(jié)果，它是判斷組分是什么物質(zhì)及其含量的依據(jù)，色譜法就是依據(jù)色譜峰的移動(dòng)速度和大小來(lái)取得組分的定性和定量分析結(jié)果的[2]。

一、定性分析

在給定的條件下，表示組分在色譜柱內(nèi)移動(dòng)速度的保留時(shí)間是判斷組分是什么物質(zhì)的指標(biāo)，即某組分在給定條件下的t值必定是某一數(shù)值。

為了盡量免除載氣流速、柱長(zhǎng)、固定液用量等操作條件的改變對(duì)使用t值作定性分析指標(biāo)時(shí)產(chǎn)生的不方便，可進(jìn)一步用組分相對(duì)保留值α或組分的保留指數(shù)來(lái)進(jìn)行定性分析。

將樣品進(jìn)行色譜分析后，按同樣的實(shí)驗(yàn)條件用純物質(zhì)作實(shí)驗(yàn)，或者查閱文獻(xiàn)，把兩者所得的定性指標(biāo)（α值、t值或I值）相比較如果樣品和純物質(zhì)都有定性指標(biāo)數(shù)值一致的色譜峰，則此樣品中有此物質(zhì)。

由于只能說(shuō)相同物質(zhì)具有相同保留值的色譜峰，而不能說(shuō)相同保留值的色譜峰都是一種物質(zhì)，所以為了更好地對(duì)色譜峰進(jìn)行定性分析，還常采用其他手段來(lái)直接定性，例如采用氣相色譜和質(zhì)譜或光譜聯(lián)用，使用選擇性的色譜檢測(cè)器，用化學(xué)試劑檢測(cè)和利用化學(xué)反應(yīng)等。

二、定量分析

色譜峰的大小由峰的高度或峰的面積確定。可用手工的方法測(cè)量峰高，再以峰高h(yuǎn)與峰高一半處的峰寬w的乘積表示峰面積A。

A=?w……………（1）

目前，新型的色譜儀都有積分儀或微處理機(jī)給出更精確的色譜峰高或面積。

應(yīng)該注意，組分進(jìn)入檢測(cè)器產(chǎn)生的相應(yīng)的色譜信號(hào)大小（峰高或峰面積）隨所用檢測(cè)器類別和載氣的不同而異，有時(shí)甚至受到物質(zhì)濃度和儀器結(jié)構(gòu)的影響。故而，須將所得的不同色譜信號(hào)予以校正以避免產(chǎn)生較大的實(shí)驗(yàn)誤差，即需要用下式校正組分的重量：

w=f′A……………（2）

式中，f^′為該組分的定量校正因子。依上式從色譜峰面積（或峰高）可得到相應(yīng)組分的重量，進(jìn)一步用下述方法之一，即可計(jì)算出組分i在樣品中的含量Wi。

（1）歸一化法：如果試樣中所有組分均能流出色譜柱，并在檢測(cè)器上都有響應(yīng)信號(hào)，都能出現(xiàn)色譜峰，可用此法計(jì)算各待測(cè)組分的含量。此法的優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便，進(jìn)樣量與載氣流速的影響不大；缺點(diǎn)是樣品中的組分必須在色譜圖中都能給出各自的峰面積，還必須知道各組分的校正因子。

（2）內(nèi)標(biāo)法：在試樣中加入一定量的純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物來(lái)測(cè)定組分的含量。內(nèi)標(biāo)物應(yīng)選用試樣中不存在的純物質(zhì)，其色譜峰應(yīng)位于待測(cè)組分色譜峰附近或幾個(gè)待測(cè)組分色譜峰的中間，并與待測(cè)組分分離，內(nèi)標(biāo)物的加入量也應(yīng)接近試樣中待測(cè)組分的含量。 此方法沒(méi)有歸一化法的缺點(diǎn)，不足之處是要求準(zhǔn)確稱取樣品和內(nèi)標(biāo)物的重量，選擇合適的內(nèi)標(biāo)物。

（3）外標(biāo)法：取待測(cè)試樣的純物質(zhì)配成一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別取一定體積，進(jìn)樣分析。從色譜圖上測(cè)出峰面積（或峰高），以峰面積（或峰高）對(duì)含量作圖即為標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后在相同的色譜操作條件，分析待測(cè)試樣，從色譜圖上測(cè)出試樣的峰面積（或峰高），由上述標(biāo)準(zhǔn)曲線查出待測(cè)組分的含量。 此法適用于工廠控制分析，特別是對(duì)各類氣體的準(zhǔn)確分析；缺點(diǎn)是難以做到進(jìn)樣量固定和操作條件穩(wěn)定，因而在一定程度上會(huì)有無(wú)法避免的誤差出現(xiàn)。

三、分析方法

分析方法實(shí)際上是在某一特定的氣相色譜分析中使用的一系列條件。建立分析方法實(shí)際上是一個(gè)過(guò)程，即確定對(duì)于某一物質(zhì)進(jìn)行分析的最佳條件。

為了滿足某一特定的分析要求，可以改變的條件包括進(jìn)樣口溫度，檢測(cè)器溫度，色譜柱溫度及其控溫程序，載氣種類及載氣流速，固定相，柱徑，柱長(zhǎng)，進(jìn)樣口類型及進(jìn)樣口流速，樣品量，進(jìn)樣方式等。檢測(cè)器還可能有其它可供調(diào)節(jié)的參數(shù)，這取決于所使用的檢測(cè)器類型。有一些氣相色譜儀還有可以控制樣品與載氣流向的閥門，這些閥門開啟與關(guān)閉的時(shí)間也可能對(duì)分析的效果有重要影響。

（1）載氣選擇與載氣流速

典型的載氣包括氦氣、氮?dú)狻鍤?、氫氣和空氣。通常，選用何種載氣取決于檢測(cè)器的類型。例如，放電離子化檢測(cè)器（DID）需要氦氣作為載氣。不過(guò)，當(dāng)對(duì)氣體樣品進(jìn)行分析的時(shí)候，載氣有時(shí)是根據(jù)樣品的母體選擇的，例如，當(dāng)對(duì)氬氣中的混合物進(jìn)行分析時(shí)，最好用氬氣作載氣，因?yàn)檫@樣做可以避免色譜圖中出現(xiàn)氬的峰。

安全性與可獲得性也會(huì)影響載氣的選擇，比如說(shuō)，氫氣可燃，而高純度的氦氣某些地區(qū)難以獲得。很多時(shí)候，檢測(cè)器不僅僅決定了載氣的種類，還決定了載氣的純度（雖然對(duì)靈敏度的要求也在很大程度上影響載氣純度的要求）。通常來(lái)說(shuō)，氣相色譜中所用的載氣，純度應(yīng)該在99.995%以上。載氣流速對(duì)分析速度的影響在方式上與溫度類似：載氣流速越高，分析速度越快，但是分離度越差。因此，最佳載氣流速的選擇與柱溫的選擇一樣，都需要在分析速度與分離度之間取得平衡。

二十世紀(jì)九十年代之前生產(chǎn)的氣相色譜儀的載氣流速往往通過(guò)載氣入口的壓力（柱前壓）進(jìn)行控制，實(shí)際的載氣流速則在柱的出口端通過(guò)電子流量計(jì)或皂膜流量計(jì)進(jìn)行測(cè)定。這樣的一個(gè)過(guò)程常常很復(fù)雜，很耗時(shí)間，而且結(jié)果往往不盡如意。

在整個(gè)運(yùn)行過(guò)程中，柱前壓不能再改變，氣流必須穩(wěn)定。氣體流速與柱前壓的關(guān)系可以通過(guò)可壓縮流體的Poiseuille方程來(lái)計(jì)算。 不過(guò)，很多現(xiàn)代的氣相色譜儀已經(jīng)能用電路自動(dòng)測(cè)定氣體流速，并通過(guò)自動(dòng)控制柱前壓來(lái)控制流速。因此，載氣壓強(qiáng)與流速可以在運(yùn)行過(guò)程中調(diào)整。

（2）進(jìn)樣口類型與流速

進(jìn)樣口類型和進(jìn)樣技術(shù)通常與樣品存在的形態(tài)（液態(tài)、氣態(tài)、被吸附、固態(tài)）以及是否存在需要?dú)饣娜軇┯嘘P(guān)。如果樣品分散良好，并且性質(zhì)已知，那么它就可以通過(guò)冷柱頭進(jìn)樣口直接進(jìn)樣；如果需要蒸發(fā)除去部分溶劑，就使用分流/不分流進(jìn)樣口（通常用注射器進(jìn)樣）；氣體樣品（如來(lái)自氣缸）通常用氣體閥進(jìn)樣器進(jìn)樣。被吸附的樣品（如在吸附管上）可以通過(guò)外部的（在線或離線）解吸裝置（如捕集-吹掃系統(tǒng)）或者在分流/不分流進(jìn)樣器中解吸（使用固相微萃取技術(shù)）。

（3）樣品量與進(jìn)樣技術(shù)

進(jìn)樣技術(shù)在氣相色譜分析中不可忽視，真正的氣相色譜分析過(guò)程從樣品進(jìn)入色譜柱開始。毛細(xì)管氣相色譜法的發(fā)展使得進(jìn)樣技術(shù)面臨著很多實(shí)踐中的問(wèn)題。柱上進(jìn)樣技術(shù)多用于填充柱而不適用于毛細(xì)管柱。在毛細(xì)管氣相色譜儀中的進(jìn)樣技術(shù)應(yīng)該滿足以下兩個(gè)條件：進(jìn)樣量不得超過(guò)柱的容量；與展開過(guò)程引起的樣品展寬相比，進(jìn)樣后的塞式流寬度應(yīng)該很小。如果不能滿足這一要求，色譜柱的分離能力將會(huì)下降。

一個(gè)普遍的規(guī)則是，注入的體積，Vinj，和檢測(cè)器的體積，Vdet，應(yīng)該只有樣品中包含被分析物的部分出柱時(shí)的體積的十分之一。以下是一些優(yōu)秀進(jìn)樣技術(shù)應(yīng)當(dāng)滿足的一般要求：應(yīng)該能使色譜柱達(dá)到它的最佳分離效率；對(duì)于小量的有代表性的（典型）樣品，進(jìn)樣應(yīng)具有準(zhǔn)確性和可重現(xiàn)性；不能改變樣品組成（對(duì)于具有不同的沸點(diǎn)、極性、濃度與熱力學(xué)穩(wěn)定性的物質(zhì)，進(jìn)樣過(guò)程中不應(yīng)有所差異）；應(yīng)該既適用于痕量分析，也適用于濃度相對(duì)較大的樣品。

（4）柱溫的選擇與控制

柱溫與溫度控制程序的設(shè)定也是特定分析中需要重點(diǎn)考慮的對(duì)象之一，氣相色譜儀中的色譜柱通常放置于溫度由電子電路精確控制的恒溫箱內(nèi)。（當(dāng)分析者說(shuō)“柱溫"時(shí)，實(shí)際上指的是恒溫箱的溫度。不過(guò)這種區(qū)別并不重要，因此在下文中對(duì)這兩者并不作區(qū)分。）樣品通過(guò)色譜柱的速率與溫度正相關(guān)。柱溫越高，樣品越快通過(guò)色譜柱。但是，樣品越快通過(guò)色譜柱，它與固定相之間的相互作用就越少，因此分離效果越差。

通常來(lái)說(shuō)，柱溫的選擇是綜合考慮分離時(shí)間與分離度的結(jié)果。柱溫在整個(gè)分析過(guò)程中不變的方法稱為恒溫方法。不過(guò)，在大部分的分析方法中，柱溫隨著分析過(guò)程的進(jìn)行逐漸上升。初溫，升溫速率（溫度“斜率"）與末溫統(tǒng)稱為控溫程序。控溫程序使得較早被洗脫的被分析物能夠得到充分的分離，同時(shí)又縮短了較晚被洗脫的被分析物通過(guò)色譜柱的時(shí)間。

4 誤差分析

對(duì)于氣相色譜儀的分析過(guò)程來(lái)說(shuō)，其中的每一個(gè)步驟，即從樣品采集、樣品制備、上機(jī)進(jìn)樣、色譜分離、檢測(cè)，以及峰面積定量等一系列過(guò)程都可能會(huì)產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)誤差，從而影響最終實(shí)驗(yàn)分析的結(jié)果。

因此，導(dǎo)致氣相色譜儀分析過(guò)程中出現(xiàn)誤差的主要因素有以下幾點(diǎn)，需要格外注意。

（1）樣品的采集與制備

檢驗(yàn)中所取樣品的代表性是得到準(zhǔn)確定量分析結(jié)果的前提，對(duì)于具有揮發(fā)性的液體樣品，采集時(shí)要盡量避免樣品組分的揮發(fā)損失；對(duì)于液體或固體樣品，要注意樣品的代表性和均一性。在樣品制備過(guò)程中，要盡量避免或減少待測(cè)組分的損失，以及防止樣品污染。

（2）進(jìn)樣系統(tǒng)

進(jìn)樣的重復(fù)性會(huì)影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度，不僅包括進(jìn)樣量是否準(zhǔn)確，還包括樣品在氣化室是否瞬間氣化，在氣化和色譜分離過(guò)程中有無(wú)分解和吸附現(xiàn)象，以及分流時(shí)是否有歧視效應(yīng)等。可以根據(jù)樣品性質(zhì)的不同，選擇不同的進(jìn)樣器和進(jìn)樣方式以降低誤差。

（3）色譜柱條件

色譜分析中，色譜柱長(zhǎng)短、柱溫高低、載氣流速、氣體分流比等都會(huì)影響樣品中化合物各組分的分離程度，只有在組分分離且峰形良好的情況下，色譜峰面積或峰高的測(cè)量準(zhǔn)確度才會(huì)更好。所以在分析組分復(fù)雜的樣品時(shí)，一般選用毛細(xì)管色譜柱程序升溫的方法以獲得較好的色譜柱分離效果，進(jìn)而提升實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確度。

（4）檢測(cè)器

氣相色譜檢測(cè)器的種類選擇、靈敏度、線性范圍、穩(wěn)定性等都將影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性，而色譜定量基于檢測(cè)器響應(yīng)值與待測(cè)組分含量的線性關(guān)系，任何檢測(cè)器的響應(yīng)都有一定的線性范圍，如超出這一范圍，響應(yīng)值與含量的關(guān)系就將偏離線性。因此，要獲得準(zhǔn)確的定量結(jié)果，絕不能使進(jìn)入檢測(cè)器的待測(cè)組分含量超出線性范圍。

（5）峰面積或峰高的測(cè)量

色譜定量的基礎(chǔ)是色譜峰面積或峰高，所以色譜峰面積或峰高判斷和測(cè)量的準(zhǔn)確性將直接影響定量的結(jié)果。相對(duì)而言，用峰高作定量對(duì)分離度的要求低于用峰面積定量。所以，在分離度較低的情況下，宜用峰高定量，保留時(shí)間短、半峰寬窄的峰，其半峰寬測(cè)定誤差相對(duì)較大，影響峰面積的測(cè)量，也宜用峰高定量。分離度較好的化合物，一般采用保留時(shí)間作定性，以峰面積為定量，由于積分區(qū)間合理，故而色譜峰面積準(zhǔn)確。

綜上所述，只有熟練掌握了氣相色譜的這些注意因素，才能提高氣相色譜的操作要領(lǐng)，實(shí)驗(yàn)分析數(shù)據(jù)才能更加精密準(zhǔn)確。